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Amélie Poulain (Audrey Tautou) n'est pas une fille comme les autres. Elle a vu son poisson rouge disparaître sous ses yeux dans un bassin municipal, sa mère (Lorella Cravotta) mourir sur le parvis de Notre-Dame et son père (Rufus) reporter toute son affection sur un nain de jardin. Amélie grandit et devient serveuse à Montmartre dans un bar tenu par une ancienne danseuse équestre, Suzanne (Claire Maurier). A 22 ans, coup de théâtre, Amélie se découvre un but : réparer la vie des autres. Elle invente alors toutes sortes de stratagèmes pour intervenir incognito dans l'existence de plusieurs personnes de son entourage. Parmi elles, il y a la concierge (Yolande Moreau) qui passe ses journées à siroter du porto en tête-à-tête avec un chien empaillé, Georgette (Isabelle Nanty), la buraliste hypocondriaque, ou M. Dufayel (Serge Merlin), connu sous le nom de "l'homme de verre", son voisin, qui ne vit qu'à travers une reproduction de Renoir. La mission d'Amélie est brusquement perturbée par la rencontre d'un garçon étrange et décalé, Nino Quincampoix (Mathieu Kassovitz). Employé à mi-temps d'un train fantôme et d'un sex-shop, Nino collectionne les photos abandonnées autour des photomatons. Il cherche désespérément à identifier un inconnu dont la photo réapparaît sans cesse, lorsque son enquête est soudain perturbée par la rencontre d'Amélie. Amélie est fascinée par Nino, mais elle préfère jouer à cache-cache avec lui plutôt que de se découvrir vraiment. Après plusieurs tentatives, elle se défile. Heureusement, "l'homme de verre", expert en repliement sur soi, lui rend la monnaie de sa pièce en la poussant dans les bras de Nino.